ANÁLISE DO PAREAMENTO 3’-TERMINAL DURANTE A REAÇÃO DE POLIMERIZAÇÃO EM CADEIA
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Nossos estudos tem o objetivo de avaliar como ocorre o pareamento 3' terminal entre o primer de PCR e a seqüência molde, e determinar o efeito da interação entre diversas condições de amplificação com a eficiência e especificidade da reação. |
participaron en la investigación
Ângela Maria Spagnol Perrone* Eldamária de Vargas Wolfgramm** Maria do Carmo Pimentel Batitucci*** Flávia de Paula*** Iúri Drumond Louro****
*Bióloga, Universidade Federal do Espírito Santo
**Graduanda em Ciências Biológicas, Universidade Federal do Espírito Santo
***Bióloga, PhD, Universidade Federal do Espírito Santo
****Médico, PhD, Universidade Federal do Espírito Santo
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Recepción del artículo: 8 de Junio, 2005
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Aprobación: 8 de Julio, 2005
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Resumen
A técnica de PCR ARMS (amplification refractory mutation system), descrita primeiramente por Newton et al, 1989 permite o diagnostico de qualquer mutação conhecida no DNA genômico de forma simples, rápida, confiável e de baixo custo. O ARMS é uma adaptação da PCR, onde dois primers senso são desenhados com tamanhos diferentes e extremidades 3’ complementares ao alelo normal ou mutado (alelo específicos) e um primer anti-senso complementar a ambos alelos, amplificando assim seqüências de tamanhos distintos. A técnica é baseada no princípio de que a Taq DNA polimerase não apresenta atividade 3’-5’ exonuclease, de modo que o mal pareamento entre a extremidade 3’ do primer e o DNA molde (template) resulta na impossibilidade de amplificação. Nossos estudos tem o objetivo de avaliar como ocorre o pareamento 3' terminal entre o primer de PCR e a seqüência molde, e determinar o efeito da interação entre diversas condições de amplificação com a eficiência e especificidade da reação. A doença utilizada como modelo foi a Fibrose Cística, onde algumas mutações de ponto são responsáveis pela maioria dos casos, nos possibilitando assim desenhar primers para as mutações conhecidas e testar suas condições de amplificação em indivíduos normais e afetados.
Palabras clave
Multiplex ARMS, primers, pareamento, amplificação, mutações
Clasificación en siicsalud
Artículos originales> Expertos de Iberoamérica>
página www.siicsalud.com/des/des046/06109000.htm
Especialidades
Principal: Bioquímica
Relacionadas: Diagnóstico por Laboratorio, Genética Humana
Enviar correspondencia a:
Iúri Drumond Louro. Departamento de Ciências Biológicas, Centro de Ciências Humanas e Naturais, Universidade Federal do Espírito Santo. Av. Marechal Campos 1468, Campus de Maruípe, CEP 29040-090, Vitória, ES, Brasil.
Artículo completo
(portugués)
Extensión:
+/- 5.56 páginas impresas en papel A4
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ANALYSIS OF THE 3’-END COMPLEMENTARITY DURING THE POLIMERASE CHAIN REACTION (PCR)
Abstract
PCR ARMS (amplification refractory mutation system) was first described by Newton et al, 1989. Soon after the method became established it was possible to make fast analyses of any known mutation in genomic DNA. The system is simple, quicker and less expensive. Two allele-specific oligonucleotide primers, one specific for the normal allele and one specific for the mutation form, together with another primer complementary to both alleles were used in the polymerase chain reaction. Because Taq DNA polymerase lacks a 3’ exonuclease activity, it is unable to repair a single-base mismatch between the primer and the template at the 3’ end of the DNA primer. We are interested to discover how the annealing between the primer and the template in the 3’ end occurs, and to know more about the effects of the interaction between the conditions of amplification and specificity/efficiency of reaction. We used cystic fibrosis as a model to test the experiments.
Key words
Multiplex ARMS, primers, aneealing, amplification, mutation
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