ANALISIS DE LA IMPLANTACION MEDIANTE EL GENOTIPO DEL GRUPO SANGUINEO ABO, EN TRASPLANTE DE CELULAS MADRE HEMATOPOYETICAS ABO- INCOMPATIBLES

Conclusión breve
Se verifica, mediante el empleo de técnicas de biología celular, que el análisis del genotipo ABO es de gran utilidad para detectar la implantación celular de un donante ABO-incompatible luego de TMH.

Resumen

Luego del trasplante de células madre hematopoyéticas (TMH) practicado en 12 pacientes se analizó la implantación mediante el estudio del genotipo del grupo sanguíneo ABO (ABO) en la unidad formadora de colonias eritrocitaria (UFC- E) y en las células mononucleares (CMN) de sangre periférica. En 10 pacientes tratados con regímenes mieloablativos se encontraron los genotipos ABO completos del donante en el día 21 posterior al trasplante. Al analizarse el genotipo ABO en cada paciente se observó recuperación hematopoyética autóloga y quimerismo mixto transitorio. El análisis del genotipo ABO es útil para la evaluación de la implantación luego de un TMH ABO-incompatible.

Palabras clave
Trasplante de células madre hematopoyéticas, implantación, genes del grupo sanguíneo ABO, UFC-E, biología molecular

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Especialidades

Principal: Hematología, Trasplantes,

Relacionadas: Bioquímica, Diagnóstico por Laboratorio, Medicina Interna,

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Kazuo Muroi, MD, Division of Cell Transplantation and Transfusion, Jichi Medical School, Minamikawachi, Tochigi 329-0498, Japón Muroi, Kazuo

ANALYSIS OF ENGRAFMENT USING ABO BLOOD GROUP GENOTYPING IN ABO-INCOMPATIBLE HEOMPOIETIC STEM CELL TRANSPLANTATION

Abstract
Background: The analysis of chimerism after hemopoietic stem cell transplantation (HST) is very important to evaluate sustained engraftment of donor cells. Although several methods have been developed, most of these methods identify differentiated cells such as mononuclear cells (MNCs), granulocytes and lymphocytes derived from donor cells. Since cDNAs for A transferase and B transferase were recently cloned, using PCR and clonal cell culture techniques, ABO blood group (ABO) genotypes of erythroid burst-forming units (BFU-E) can be analyzed after ABO-incompatible HST. Materials, methods and results: DNA was serially extracted from erythroid colonies and peripheral blood MNCs in 12 patients who received an ABO-incompatible hemopoietic stem cell transplant. DNA samples were amplified by PCR using specific primers for the A, B and O alleles. Flow cytometric identification of red blood cells (RBCs) was conducted using monoclonal antibodies specific for ABO antigens. Complete conversion to the donor’s ABO genotype was found on day +21 in 10 patients treated with myeloablative regimens. In contrast, recipient’s RBCs were detected until day +85. Autologous hemopoietic recovery was early detected by ABO genotypic analysis of BFU-E in one patient after HST. Another patient treated with a non-myeloablative regimen showed a transient mixed ABO genotypic chimerism of BFU-E and peripheral blood MNCs, followed by complete donor ABO genotypic chimerism in both cells. Conclusion: ABO genotypic analysis is useful for evaluating engraftment of donor cells after ABO-incompatible HST, although identifying complete donor chimerism, complete differences in ABO genes between the donor and recipient are necessary.

Key words
Hemopoietic stem cell transplantation, engraftment, chimerism, ABO blood group gene, BFU-E

ANALISIS DE LA IMPLANTACION MEDIANTE EL GENOTIPO DEL GRUPO SANGUINEO ABO, EN TRASPLANTE DE CELULAS MADRE HEMATOPOYETICAS ABO- INCOMPATIBLES

(especial para SIIC © Derechos reservados)

Artículo completo
Introducción
Al clonarse el ADNc de la transferasa A (α1→3GalNAc transferasa) y de la transferasa B (α1→3Gal transferasa) se demostró que el ADNc del alelo O es idéntico al del alelo A, excepto por la supresión de un único nucleótido.^1,2 Este estudio evaluó la implantación de las células del donante, mediante el análisis del genotipo ABO.
Materiales y métodos
Doce pacientes recibieron trasplante de células madre hematopoyéticas de donantes ABO-incompatibles (tabla 1). Las muestras de ADN fueron amplificadas mediante el uso de reacción en cadena de la polimerasa (PCR); se utilizaron los iniciadores específicos GA23, GA13, GA14 y GA24.³ Los iniciadores GA23 y GA13 fueron diseñados para detectar sustituciones en el alelo B; los iniciadores GA23 y GA14, en el alelo A, y los iniciadores GA24 y GA14 se diseñaron para detectar la supresión de una única base en el alelo O. Posteriormente, los glóbulos rojos fueron analizadas mediante citometría de flujo.³ Se seleccionaron colonias eritrocitarias derivadas de las CMN de sangre periférica que fueron agrupadas y utilizadas para el análisis de los genotipos ABO.⁴

Resultados y discusión
Las figuras 1 y 2 muestran cambios en los genotipos ABO y en los fenotipos ABO antes y después del TMH. Se analizaron los genotipos ABO de las UFC-E en los receptores (R) 1 al R6 y aquellos de las CMN en sangre periférica en los R7 al R12. Los análisis del genotipo ABO comenzaron al día siguiente en el cual el recuento leucocitario superó 110⁹/l y fueron realizados con intervalos aproximados de 14 a 28 días. Luego del TMH a pacientes mielosuprimidos, el tiempo transcurrido hasta la detección más precoz de un quimerismo completo del genotipo donante ABO fue de 23 días en promedio. En el R5 se demostró la recuperación celular de la propia serie hematopoyética luego del TMH.⁵ Resultados similares se obtuvieron mediante el análisis del genotipo ABO en las CMN de sangre periférica. El R6, a quien no se le había realizado mieloablación, mostró una condición similar a la aplasia pura glóbulos rojos, asociada con el TMH tipo ABO-incompatible principal.^6,7 En ese momento, las UFC-E en médula ósea, así como las CMN de sangre periférica, exhibieron quimerismo mixto del genotipo ABO, seguido por quiemerismo completo del genotipo ABO donante (figura 3).

El análisis del genotipo ABO es útil para la evaluación de la implantación de las células del donante luego de un TMH ABO-incompatible. Demostramos que el análisis del genotipo ABO es superior al análisis del fenotipo ABO en caso de incompatibilidad de los genes ABO entre el donante y el receptor.Los autores no manifiestan conflictos.

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