LA RESISTENCIA A DROGAS MODIFICA LAS CARACTERISTICAS INMUNOLOGICAS DE LOS RABDOMIOSARCOMAS

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Cuando el tratamiento quimioterapéutico convencional deja de ser efectivo en pacientes con rabdomiosarcoma (RMS), el pronóstico empeora notablemente. Determinamos la aparición de un fenómeno de resistencia a drogas mediado por P-glicoproteína (P-gp)/mdr1 en pacientes con RMS embrionario y tratados con un esquema de poliquimioterapia convencional. Este fenómeno podría explicar el fracaso en el tratamiento con citotóxicos en estos pacientes y también los cambios observados en las características inmunológicas de sus células tumorales como es el aumento significativo en la expresión de HLA de clase I. Las implicaciones biológicas de la modificación de estas moléculas, dada su relación con la capacidad metastásica y su importancia en el desarrollo de estrategias inmunoterapéuticas, hacen que estos hallazgos puedan ser útiles para avanzar en el abordaje de este tipo de tumores.Los RMS, los tumores derivados de tejido mesodérmico más frecuentes en la edad pediátrica, mejoraron su pronóstico en los últimos años.1 La quimioterapia usada (vinca-alcaloides, la actinomicina D, agentes alquilantes y antraciclinas) está siendo más efectiva. No obstante, con frecuencia, tras una adecuada respuesta, se produce una recaída que, en general, tiene mal pronóstico. Este fracaso puede deberse al desarrollo de resistencia a drogas.2 Entre sus mecanismos destaca la presencia de una proteína de membrana (P-glicoproteína) que actúa como una bomba de eflujo y que es codificada por el gen mdr1.3,4 La aparición de esta proteína puede asociarse a cambios en la estructura de las células resistentes,5 entre los que puede encontrarse la posible modulación de los antígenos HLA.6 ¿Qué implicaciones clínicas puede tener este hecho En realidad, no se conocen, pero podrían ser importantes en el pronóstico, en la modificación de la capacidad metastásica o en el desarrollo de nuevas inmunoterapias.7,8Es pues importante analizar el desarrollo de resistencia y las implicaciones que este fenómeno pueda tener en los RMS embrionarios. Para conseguir este objetivo hemos realizado un doble estudio, clínico y experimental. El primero, en biopsias de pacientes con RMS embrionario (media de edad 6 años, diferentes localizaciones y tratados con quimioterapia convencional). El segundo, basado en el desarrollo de dos líneas de RMS embrionario (A-204-1 y A-204-2)9 resistentes a dosis clínicas de actinomicina D. Mediante Northern blot se determinó la expresión de mdr1 (cuantificada en relación con la señal de beta-actina). La RT-PCR nos permitió detectar mdr1 en las biopsias (cuantificado mediante la relación mdr1/beta-actina). Por otra parte, la expresión de HLA de clase I se determinó mediante inmunohistoquímica (peroxidasa) en los tejidos (anticuerpos W6/32 y GRH1) y mediante fluorocitometría de flujo en las células resistentes (media de fluorescencia). Además, las células fueron sometidas a ensayos de citotoxicidad para determinar la concentración inhibitoria 50 (CI50) con o sin bloqueo de P-gp mediante el agente verapamilo. Finalmente, los resultados fueron analizados estadísticamente mediante la t de Student y correlación de Sperman con el SPSS versión 12.0.Los resultados más relevantes fueron los siguientes. De los catorce pacientes analizados, siete fueron PCR positivos para mdr1 (expresión entre 2.08+0.4 y 0.34+0.09. Seis muestras fueron negativas y una dudosa (posiblemente por degradación del RNA). El estudio inmunohistoquímico de HLA de clase I mostró que de los siete RMS PCR positivos, cinco (71%) fueron positivos para HLA clase I (cuatro con fuerte tinción y uno con tinción moderada). Por el contrario, de las seis muestras negativas para la PCR sólo una mostró una débil tinción para HLA. En el resto, HLA fue negativo (83%). Existió una correlación positiva (0.973) entre la expresión de HLA clase I y la relación mdr1/beta-actina. Por otra parte, los niveles de mdr1 en las líneas resistentes fueron en A-204-1, 7+1.5 y en A-204-2, 6.8+1.3, en comparación con la línea parental (1.2+0.3). La ID50 de ambas líneas también fue mayor (30 veces) que la de la parental. El bloqueo de P-gp produjo un incremento (12 y 20 veces) de la acción de actinomicina D en las líneas A-204-1 y A-204-2, respectivamente. Finalmente, observamos un incremento en la expresión de HLA de clase I de un 111% y un 137% (A-204-1 y A-204-2) en la media de fluorescencia en relación con la línea parental. Tras el tratamiento con verapamilo la expresión de HLA en ambas líneas disminuyó (46.5% y 57.3%).Nuestros resultados demuestran que P-gp no sólo aparece asociada al uso de citotóxicos en el tratamiento de los RMS, sino que además modifica las características inmunológicas de las células de RMS aumentando su nivel de HLA de clase I. Esta modificación es relevante ya que en algunos casos RMS resistentes presentan aumentos de diferenciación10 y este hecho está relacionado con su mal pronóstico,11,12 y además, porque la modulación de HLA se asocia a cambios en el potencial metastásico de células tumorales.13 Nuestros resultados en RMS demuestran que un 54% posee expresión de mdr1 (similares resultados que Komdeur y col.3 Sin embargo, más importante es que la mayoría de estos pacientes mostraron elevados niveles de HLA. Esto sugiere que el tratamiento convencional en RMS puede modular HLA de clase I en asociación al desarrollo de resistencia. Los datos obtenidos de los cultivos indican que P-gp es la inductora de esta modificación, ya que cuando es bloqueada con verapamilo, la expresión de HLA disminuye significativamente. Es conocido que líneas resistentes de leucemia que expresan diferentes cantidades de moléculas MHC tienen diferente susceptibilidad para la aplicación de la inmunoterapia.14 Recientemente se demostró que la baja regulación de HLA de clase I en células de cáncer de pulmón se asocia a modificaciones en la supervivencia de los pacientes.15 Necesitaremos más estudios para determinar la importancia de la modulación antigénica en células resistentes de RMS.

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