ANALIZAN LA DISEMINACIÓN DE DETERMINANTES DE RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS DEL GÉNERO SHEWANELLA EN EL AMBIENTE HOSPITALARIO

Maria Soledad Ramirez¹,Andrea Karina Merkier²,Marisa Almuzara³,Carlos Vay⁴ y Centrón Daniela⁵

¹Bioquimica, Investigador, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina
²Bioquimica, Investigador, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina
³Bioquimica, Investigador, Universidad De Buenos Aires
⁴Bioquimico, Porfesor, Uiversidad De Buenos Aires
⁵Bióloga, Profesor, Facultad De Medicina, Universidad De Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina

Buenos Aires, Argentina (SIIC)

La alta frecuencia de diseminación de los determinantes de resistencia a antibióticos asociados a la transferencia horizontal de genes en aislamientos intrahospitalarios de Shewanella demuestra la capacidad de este género para actuar como reservorio y vector de la resistencia a antibióticos.

Shewanella spp. es generalmente considerado como un género cuyo nicho ecológico es el medio ambiente. Aunque las infecciones son muy poco frecuentes, en los últimos años se han descrito varios casos en infecciones humanas. La resistencia natural a los antimicrobianos de dicho género, así como el tratamiento antibiótico recomendado de sus infecciones, son desconocidos. El objetivo de nuestro estudio fue investigar los mecanismos de resistencia a los antimicrobianos adquiridos por este género en el ambiente hospitalario. Todos los aislamientos identificados como Shewanella spp. mediante pruebas bioquímicas estándar fueron recolectados en un hospital público de la Argentina durante el período 2005-2006: tres aislamientos fueron identificados como Shewanella putrefaciens y siete como Shewanella algae.
El nivel de especie fue confirmado por secuenciación del gen ARNr 16S. Se utilizaron cebadores específicos en la técnica de PCR con el ADN total de cada aislamiento para evaluar la presencia de los determinantes de resistencia a los antimicrobianos asociados a la transferencia horizontal de genes: I) los genes de la integrasa de los integrones intI1, intI2, e intI3, II) 13 genes lque codifican para betalactamasas: blaOXA-58, blaOXA-48, blaTEM, blaCTX-M-2, blaSHV-como, blasco-1, blaPER-2, blaGES, blaVEB, blaIMP, blaVIM, blaSPM-1 y blaOXA 23 y III) los genes sul1, sul2 y sul3. Se detectó la presencia de la integrasa de tipo 1 en nueve aislamientos, mientras que el tipo 2 del gen de la integrasa se encontró en seis aislamientos. Con el fin de identificar los genes-casetes insertados dentro de la región variable de integrones, se realizó la cartografía por PCR y secuenciación de los productos obtenidos.

En cuanto a la región variable de los integrones de clase 1 (VR-1), encontramos la presencia del gen-casete dfrA1 en los aislamientos Sa9, Sa82, y Sa392, y el rearreglo dfrA1-aadA1 en Sa74, SA10, y Sa2. Tres aislamientos (SP117, SP95 y SP31) fracasaron en la identificación de los genes-casetes dentro de la VR-1. En cuanto a los integrones de clase 2, sólo la región variable de Sa2 que albergaba el rearreglo dfrA1-SAT2-aadA1-orfX-ybfA-ybfB-ybgA, de Sa9 que albergaba dfrA1-SAT2 y de SA10 que albergaba el gen-casete dfrA1 pudieron ser identificados. También detectamos que el gen sul1 estaba presente en nueve aislamientos, y el gen sul2 gen en ocho. Además, como el gen-casete dfrA1 estaba presente en todas las regiones variables de los integrones de clase 1 y 2 identificados, se determinó los valores de CIM a la trimetoprima y a la trimetoprima-sulfametoxazol según especificaciones del CLSI. Sin embargo, y pese a que no hay datos disponibles en el CLSI con respecto a los puntos de corte en este género, no identificamos una clara contribución de estas mecanismos a la resistencia a la trimetoprima ni a la trimetoprima-sulfametoxazol.
Cuando se investigó la presencia de los trece genes de betalactamasas, se obtuvieron resultados positivos para las tres cepas de S. putrefaciens, utilizando los cebadores para la amplificación de blaOXA-48, que ha sido previamente descrita en un transposón en un aislamiento de Klebsiella pneumoniae en Francia. El análisis de la secuencia reveló el 99% de identidad en 690 pb de longitud con este gen, y el 78% de identidad con el gen de la blaOXA codificada en el cromosoma de S. putresfaciens S. NC-32 (CP000681.1) utilizando el software V2.0 Blast. Por otro lado, tampoco se pudo establecer una clara contribución de este gen al perfil de resistencia a los carbapenémicos en estos aislamientos de Shewanella spp. No sólo se identificó una gran dispersión de los elementos genéticos por lo general asociados a la transferencia horizontal de genes, sino también un patrón diferencial en la epidemiología en ambas especies, ya que los aislamientos de S. putrefasciens tienen el gen blaOXA-48 e integrones de clase 1, mientras que los aislamientos de S. algae presentan integrones de clases 1 y 2 con rearreglos diferentes en la región variable de ambas especies.
Teniendo en cuenta que todas las especies de Shewanella son bien conocidas como habitantes del medio ambiente, y que casi todos los aislamientos poseían integrones y otros factores determinantes de relevancia de la resistencia como la carbapenemasa blaoxa-48, por lo general asociado a la transferencia horizontal de genes, este género podría ser considerado no sólo un reservorio potencial, sino también un vector de los mecanismos de resistencia a los antimicrobianos entre los hospitales y el medio ambiente.

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